Köm, Doğa BuseÇataltepe, Sude NazBudak, GüldenDal Yöntem, Fulya2025-10-312025-10-312025Köm, D. B., Çataltepe, S. N., Budak, G., & Dal Yöntem, F. (2025). The impact of culture conditions on mitochondrial dynamics in different cell types. 7. Uluslararası ve 36. Ulusal Biyofizik Kongresi / 7th International and 36th National Biophysics Congress 3-6 Eylül, pp. 190-191.https://hdl.handle.net/20.500.13055/1158Aim: Mitochondria continuously undergo fusion and fission processes to maintain their structural integrity and function and mitochondrial dynamics can vary between cells representing various pathologies. Culture conditions such as seeding density, passage number, and incubation time, which are commonly manipulated in cell culture studies, may influence mitochondrial morphology. The observation that the same cell line can exhibit both fusion and fission dominant phenotypes suggests that culture conditions play a role in shaping mitochondrial dynamics. This study aims to investigate the effects of in vitro culture conditions on mitochondrial dynamics. Material and Method: A549 (human lung cancer cells), BEAS-2B (human bronchial epithelial cells), MCF7 (human breast cancer cells), A375 (human malignant melanoma cells), and RPE1 (human retinal pigment epithelial cells) were incubated at early (passage 10–12) and late (passage 20–22) passages under varying seeding densities and durations (24, 48, and 72 hours). Mitochondria were stained with MitoTracker Green, and morphological analysis was performed using fluorescence microscopy. Mitochondrial fragmentation was assessed using ImageJ Fiji software, and statistical analyses were conducted using GraphPad software. Results: In all cell lines, the culture condition of 100,000 cells for 24 hours was used as the control group, and mitochondrial fragmentation was observed to vary depending on cell type, incubation duration, and cell density. In A549 cells, fragmentation at 48 hours with 100,000 cells was found to be five times higher compared to 72 hours with 80,000 cells. In MCF-7 cells, fragmentation at 72 hours with 80,000 cells was approximately 1.6 times higher than at 48 hours with 170,000 cells. In BEAS-2B and RPE1 cells, no significant changes in mitochondrial dynamics were observed in response to incubation time or cell density. Conclusion: Prolonged culture duration increases mitochondrial fusion in A549 cells, whereas both incubation time and cell density notably affect mitochondrial fission in MCF7 cells. In contrast, mitochondrial dynamics in BEAS-2B and RPE1 cells are not significantly influenced by incubation time or cell density. These findings suggest that cell type–specific culture conditions can have distinct impacts on mitochondrial morphology.Amaç: Mitokondriler, yapısal bütünlük ve fonksiyonlarını korumak için sürekli füzyon ve fizyon süreçlerinden geçmektedir. Mitokondri dinamikleri, farklı kökene sahip ya da çeşitli patolojileri temsil eden hücrelerde farklılık gösterebilmektedir. Hücre kültürü çalışmalarında yaygın olarak kullanılan bu hücrelerde, ekim yoğunluğu, pasaj sayısı ve inkübasyon süresi gibi kültür koşulları, mitokondri morfolojisi ve dinamikleri üzerinde belirleyici rol oynamaktadır. Aynı hücre hattının hem füzyon hem de fizyon-dominant fenotipler göstermesi, kültür koşullarının mitokondri dinamiklerini şekillendirmede rolü olduğunu düşündürmektedir. Bu çalışma, hücre ekim yoğunluğu, pasaj sayısı ve inkübasyon süresi gibi in vitro kültür koşullarının mitokondri dinamikleri üzerindeki etkilerini incelemeyi amaçlamaktadır. Gereç ve Yöntemler: A549 (insan akciğer kanser hücreleri), BEAS-2B (insan bronşiyal epitel hücreleri), MCF7 (insan meme kanser hücreleri), A375 (insan malign melanoma hücreleri) ve RPE1 (insan retinal pigment epitel hücreleri), erken (10–12) ve geç (20–22) pasaj aralıklarında, farklı ekim yoğunlukları ve sürelerde (24, 48 ve 72 saat) inkübe edildi. Mitokondriler MitoTracker Green ile boyandı, morfolojik analiz floresan mikroskopi ile gerçekleştirildi. Mitokondriyal fragmentasyon, ImageJ Fiji yazılımı ile, istatistiksel analizler ise Graphpad yazılımı kullanılarak değerlendirildi. Bulgular: Tüm hücrelerde, kontrol grubu olarak 24 saatlik 100.000 hücrelik kültür koşulları referans alınmış ve mitokondriyal fragmentasyonun hücre tipi, inkübasyon süresi ile hücre yoğunluğuna bağlı değiştiği gözlemlenmiştir. A549 hücrelerinde fragmentasyonun 48 saat 100.000 hücrede, 72 saat 80.000 hücre yoğunluğuna göre 5 kat daha fazla olduğu belirlenmiştir. MCF-7 hücrelerinde ise fragmentasyonun, 72 saat 80.000 hücrede 48 saat 170.000 hücreye kıyasla yaklaşık 1,6 kat fazla olduğu belirlenmiştir. BEAS-2B ve RPE1 hücrelerinde ise inkübasyon veya hücre yoğunluğuna göre mitokondri dinamiklerinde anlamlı bir değişiklik görülmemiştir. Sonuç: In A549 cells, prolonged culture duration was found to enhance mitochondrial fusion, whereas in MCF7 cells, increased incubation time and cell density promoted mitochondrial fission. In contrast, mitochondrial dynamics in BEAS-2B and RPE1 cells were not significantly affected by incubation duration or cell density. These findings suggest that cell type-specific culture conditions can differentially influence mitochondrial morphology.eninfo:eu-repo/semantics/openAccessMitochondrial FissionMitochondrial FusionCell CultureCell DensityMitokondriyal FizyonMitokondriyal FüzyonHücre KültürüHücre YoğunluğuConference Object190191