Periodontal ligament hücre hattında kafeik asit fenetil esterin yara ı̇yileşmesi ve gen ı̇fadeleri üzerinde etkileri

Bu çalışma, çocuk hastalarda ebeveynlerin sentetik ilaçlara kıyasla daha fazla tercih ettikleri bitkisel ve doğal tedavi yöntemlerine bir alternatif olarak, periodontal hastalıkların önlenmesi ve tedavisinde kafeik asit fenetil ester'in (KAFE) periodontal ligament (PDL) hücre hattına uygulanması ile hücre canlılığı, yara kapanması ve yara iyileşmesindeki markör genlerin moleküler seviyede etkisini göstermeyi amaçlamaktadır. KAFE propoliste bulunan çok geniş spektrumlu bir biyoaktif bileşendir. Yetişkin hastadan alınan PDL hücre hattı ile yapılacak olan çalışma için Etik Kurulu onayı alınmış ve çalışmaya dahil edilmiştir. PDL hücreleri kültür ortamına alınmış ve pasajlanmıştır. Pasajlanan kültürlerde hücre canlılığını arttırıcı doz araştırılmış ve 2.5 µM KAFE uygulanan hücrelerde 48. saatin sonunda istatistiksel olarak anlamlı olarak hücre canlılığının arttığı gözlemlenmiştir (p=0.007). Çalışmanın diğer aşamaları olan yara kapanması çizik testi ve yara iyileşmesinde markör genlerin etkinliğinin gösterilmesi için PDL hücrelerinde canlılığı artırıcı etkisini göstermiş olduğumuz 2.5 µM KAFE dozu seçilmiş ve çalışma bu şekilde devam ettirilmiştir. Çizik testinde 2.5 µM KAFE uygulanan PDL hücre hatlarında kontrol grubuna kıyasla yaklaşık olarak 2.8 kat yara kapanmasını arttırıcı etki gösterilmiştir (p=0,00001). Bu sonuç ile beraber KAFE'nin PDL hücre hatlarında hem hücre canlılığını hem de yara iyileşmesini arttırıcı etkisi gösterilmiştir. Bu etkinin moleküler seviyede desteklenmesi için yara iyileşmesi ile ilişkili markör genlerin ifadelerine bakılmıştır. Hücre proliferasyonunda etkili olan PI3K/AKT/mTOR sinyal yolağı, Bcl-2 anti apoptotik geni ve oksidatif streste etkili NF-κB transkripsiyon faktörüne etkileri de gösterilerek KAFE'nin PDL hücre hatlarında yara iyileşmesine etkisi moleküler düzeyde desteklenmiştir. Günümüz koşullarında hastalar sentetik ilaçlar yerine bitkisel ve doğal alternatiflere hızla yönelmektedir. Özellikle çocuk hastalarda ebeveynler sentetik ilaçların yan etkileri ve güvenilir bulunmamaları sebebiyle doğal alternatiflere daha fazla ihtiyaç duymaktadır. Yapmış olduğumuz çalışmada PDL hücre hattında KAFE'nin hücre canlılığını ve yara kapanmasını arttırıcı etkisi gösterilmiş olup moleküler seviyede markör genlerin ifadesindeki artış ile bu veri desteklenmiştir. Elde ettiğimiz veriler KAFE'nin periodontal hastalıkların tedavisinde kullanılması konusunda ümit vaadeden sonuçlar ortaya koymaktadır.

The aim of this study was to find out the impact of a natural compound, which parents currently prefer instead of synthetic drugs for pediatric dentistry, caffeic acid phenethyl esther (CAPE) on periodontal ligament (PDL) cell line in terms of cell viability, wound healing and gene expression levels of marker genes at molecular level to provide a potential alternative natural compound for treatment of periodontal diseases CAPE is bioactive compound of propolis with wide spectrum. To apply experiments on periodontal ligament cell line provided by adult patient, approval of Ethics Committe has been included to study. PDL cells cultured into cell culture environment and passaged to maintain a healthy cell culture environment. In subcultured cells, dose of additive effect on cell viability has been observed and 2.5 µM CAPE concentration revealed a statistically significant result to increase cell viability after 48 hours to compare with control group (p=0.007). This additive effect dose on cell viability, 2.5 µM CAPE concentration, was selected to maintain the study which aims to find out wound healing of scratch assay and the gene expression levels of marker genes. Scratch assay found out approximately 2.8 times more wound healing for 2.5 µM CAPE concentration on PDL cell line (p=0,00001). Both of these results demonstrated the possitive affects of CAPE for wound healing and cell viability on PDL cell lines. To support this data at molecular level, expression levels of marker genes for wound healing were investigated. Wound healing affect of CAPE on PDL cell line was supported at molecular level by gene expression levels of PI3K/AKT/mTOR signalling pathway responsible for cell prolifreation, Bcl- 2 anti apoptotic gene and NF-κB transcription factor which regulates oxidative stress pathways. Recent conditions demonstrated that alternative herbal and natural compounds were preferred by patients instead of synthetic drugs. In particular for pediatric patients, synthetic drugs were evaluated non-reliable with their side effects by patients, thus, requirement of alternative natural compounds is increased. This study revealed the cell viability, wound healing affect of CAPE on PDL cell line and gene expression levels of marker genes supported this impact at molecular level. Our datas suggested CAPE as a promising natural compound to cure periodontal diseases.